Barwienie plemników metodą Papanicolau do oceny morfologii
16 stycznia 2012Jedną z rekomendowanych przez WHO 2010 metod barwienia plemników służącą do oceny ich morfologii jest barwienie Papanicolau. Przed wykonaniem barwienia należy wykonać rozmaz nasienia na szkiełku podstawowym. W tym celu należy nanieść kroplę dokładnie wymieszanego nasienia na koniec szkiełka i wykonać pewnym, nieprzerwanym ruchem rozmaz za pomocą krawędzi drugiego szkiełka (nie „pchamy” kropli szkiełkiem rozmazującym, ale „ciągniemy” ją za nim. Dla każdego pacjenta należy wykonać dwa rozmazy.
Po wysuszeniu rozmazu (ok. 15 minut w temperaturze pokojowej) wykonuje się barwienie preparatu zanurzając szkiełko w szeregu odczynników wg kolejności przedstawionej poniżej. W prawej kolumnie przedstawiono czas na jaki należy zanurzyć preparat albo ilość jego zanurzeń jaką powinno się wykonać.
W metodzie Papanicolau główki plemników barwią się na kolor niebieski (jasno-niebieski akrosom i ciemno-niebieska/granatowa część postakrosomalna główki). Nadmiar resztkowej cytoplazmy (w obrębie wstawki) barwi się na kolor czerwony lub różowy. Witka barwi się kolor niebieski lub czerwonawy.
|
Odczynniki |
Czas zanurzenia / ilość zanurzeń preparatu w odczynniku |
| 1. Etanol 95% (v/v) – utrwalanie |
minimum 15 min. |
| 2. Etanol 80% (v/v) |
10 zanurzeń / 30 sek. |
| 3. Etanol 70% (v/v) (etap opcjonalny) |
10 zanurzeń / 30 sek. |
| 4. Etanol 50% (v/v) |
10 zanurzeń / 30 sek. |
| 5. Woda destylowana |
10 zanurzeń / 30 sek. |
| 6. Hematoksylina Harrisa |
3-4 min. |
| 7. Woda destylowana |
1-3 min. |
| 8. Kwaśny etanol |
4-8 zanurzeń |
| 9. Woda bieżąca |
3-5 min. |
| 10. Etanol 50% (v/v) |
10 zanurzeń / 30 sek. |
| 11. Etanol 70% (v/v) (etap opcjonalny) |
10 zanurzeń / 30 sek. |
| 12. Etanol 80% (v/v) |
10 zanurzeń / 30 sek. |
| 13. Etanol 95% (v/v) |
15 min. |
| 14. Orange G 6 |
1-2 min. |
| 15. Etanol 95% (v/v) |
10 zanurzeń / 30 sek. |
| 16. Etanol 95% (v/v) |
10 zanurzeń / 30 sek. |
| 17. EA-50 |
1-5 min. |
| 18. Etanol 95% (v/v) |
10 zanurzeń / 30 sek. |
| 19. Etanol 95% (v/v) |
10 zanurzeń / 30 sek. |
| 20. Etanol 100% |
5 zanurzeń / 15 sek. |
| 21. Etanol 100% |
5 zanurzeń / 15 sek. |
Dla prawidłowej oceny morfologii plemników wybarwiony preparat należy oglądać pod immersją i powiększeniem 1000x. Powinno oceniać się minimum 200 plemników w dwóch preparatach.
Innymi zalecanym przez WHO 2010 metodami barwienia do oceny morfologii plemników jest barwienie metodą Shorr’a oraz Diff Quick.